目的探讨血清核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）联合检测对类风湿关节炎（RA）的辅助诊断价值。方法选取该院2023年6月至2024年12月收治的70例RA患者作为研究组。另选取同期在该院体检的70例健康者作为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测所有研究对象血清RANKL、MMP-3水平；采用免疫比浊法检测所有研究对象血清免疫球蛋白（Ig）A、IgG、抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）、类风湿因子（RF）水平。采用Pearson相关分析RA患者血清RANKL、MMP-3水平之间及其与免疫指标的相关性。采用多因素Logistic回归分析RA发生的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清RANKL、MMP-3对RA的辅助诊断价值。结果研究组血清IgA、IgG、抗CCP抗体、RF水平均高于对照组（P＜0.05）。研究组血清RANKL、MMP-3水平均高于对照组（P＜0.05）。Pearson相关分析结果显示,RA患者RANKL、MMP-3水平之间及其与IgA、IgG、抗CCP抗体、RF水平均呈正相关（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,血清RANKL、MMP-3、IgA、IgG、抗CCP抗体、RF水平升高均是发生RA的危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析结果显示,血清RANKL、MMP-3单独及2项联合辅助诊断RA的曲线下面积（AUC）分别为0.851、0.866、0.946,2项联合辅助诊断的AUC大于各指标单独辅助诊断的AUC（P＜0.05）。结论RA患者血清RANKL、MMP-3水平升高,且二者水平升高均为发生RA的危险因素,2项指标联合检测在区分RA患者与健康人群时具有较高的辅助诊断价值。