目的评估聚集诱导发光四苯基乙烯（TPE）-2BC荧光探针在革兰阳性菌快速检测中的应用价值。方法合成TPE-2BC荧光探针，并通过紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱进行表征。采用荧光共聚焦显微镜检测不同菌种并建立标准曲线。收集63株临床分离的革兰阳性菌进行验证，并与传统培养法及革兰染色法进行比较。结果TPE-2BC荧光探针表现出典型的聚集诱导发光特性，对革兰阳性菌具有高度选择性，其荧光强度是革兰阴性菌的8~12倍。检测限为10 2 CFU/mL，线性范围为10 2~10 8 CFU/mL。临床验证显示其诊断性能优异，检测时间为52 min，准确度明显优于革兰染色法，且与传统培养法结果一致。TPE-2BC荧光探针成功检出63株临床分离菌中的61株，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌属及链球菌属等多种菌种。TPE-2BC荧光探针在复杂生物基质中保持稳定的荧光信号，且在不同临床科室标本中均表现出良好的分析性能。结论TPE-2BC荧光探针在革兰阳性菌检测中具有突出的选择性、灵敏度及实用性，可为临床快速诊断提供可靠的技术支持。