目的探讨血清促肾上腺皮质激素（ACTH）、肿瘤坏死因子受体相关因子-6（TRAF6）、免疫调节分子T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白3（Tim-3）联合检测对肛瘘患者术后切口感染的预测价值。方法选取2023年1月至2024年12月该院收治的需进行手术治疗的417例肛瘘患者为疾病组，另选取同期在该院进行健康体检者232例为对照组。根据术后切口是否感染分为感染组和未感染组，利用倾向性评分匹配（PSM）方法控制混杂因素。采用酶联免疫吸附试验检测所有参与者血清ACTH、TRAF6、Tim-3水平。采用多因素Logistic回归分析肛瘘患者术后切口感染的影响因素。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清ACTH、TRAF6、Tim-3对肛瘘患者术后切口感染的预测价值。结果疾病组血清ACTH、TRAF6、Tim-3水平高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。417例肛瘘患者中，术后发生切口感染41例，占比9.83%，未发生切口感染376例，占比90.17%。PSM前，感染组复杂性肛瘘类型占比及血清ACTH、TRAF6、Tim-3水平高于未感染组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。PSM后，感染组复杂性肛瘘类型占比及血清ACTH、TRAF6、Tim-3水平高于未感染组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，血清ACTH、TRAF6、Tim-3水平升高是肛瘘患者术后切口感染的危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清ACTH、TRAF6、Tim-3单独及3项指标联合预测肛瘘患者术后切口感染的曲线下面积（AUC）分别为0.811、0.825、0.845、0.945。3项指标联合预测的AUC大于血清ACTH、TRAF6、Tim-3单独预测的AUC（Z=3.112、2.828、3.313，均P＜0.05）。结论术后发生切口感染的肛瘘患者血清ACTH、TRAF6、Tim-3水平升高，3项指标可用作预测肛瘘患者术后切口感染的生物标志物，3项指标联合检测对肛瘘患者术后切口感染有较高的预测价值。