目的调查耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌血流感染(CRE-BSI)的临床科室分布及耐药情况，分析其耐药基因型、毒力因子，以指导临床诊疗中抗菌药物的合理使用，预防耐药菌株的传播。方法收集2021—2022年济宁市第一人民医院分离的21株临床CRE-BSI菌株,分析菌株的药敏结果；检测菌株的碳青霉烯酶基因（KPC、OXA-48、VIM、IMP、NDM）；提取菌株DNA，并进行多位点序列分型（MLST）。结果21株CRE-BSI菌株中，12株源于重症医学科，除对替加环素、多黏菌素/黏菌素、阿米卡星、米诺环素敏感性较好，部分菌株抗菌药物耐药率为100.00%。21株菌株中，肺炎克雷伯菌10株，大肠埃希菌10株，均以blaNDM为主要产酶基因型；MLST结果显示，肺炎克雷伯菌主要流行ST11，大肠埃希菌主要流行ST361、ST410。毒力因子均有不同数量的检出，其中iroN、fimH检出率最高，分别为100.00%（20/20）、85.00%（17/20）。结论济宁市第一人民医院分离的临床CRE-BSI菌株肺炎克雷伯菌中blaKPC-2为主要产酶基因，大肠埃希菌中blaNDM-5为主要产酶基因型，可能存在克隆流行和水平传播，临床需加强抗菌药物应用的监管，预防CRE院内爆发。